Dizemos que o Meio Interno é uma forma fisiológica de nos referirmos ao compartimento extracelular do corpo. Trata-se da linfa, sangue e liquor, ou seja, é o conjunto de líquidos extracelulares. Através desses líquidos ocorrem trocas metabólicas, havendo comunicação entre diferentes e distantes locais no organismo.
Sangue
É o principal líquido e, de maior volume, do meio interno. Em laboratórios separamos a parte líquida da celular do sangue. Podemos dizer que os produtos derivados do sangue são: SORO E PLASMA.
Para que possamos obter do soro ou do plasma sanguíneo há dois procedimentos:
Com anticoagulante: É feita a coleta do sangue com anticoagulante, como é o caso do EDTA, ou o citrato, seguidos pela centrifugação à 3000rpm por 5 minutos, fazendo com que o for mais denso vá para baixo. Há a separação do material em três fases, onde o mais pesado fica no fundo, compreendendo as hemácias, caracterizada como segmento vermelho; na fase intermediária há uma formação de células brancas, chamadas de leucócitos; acima e chamado de "sobrenadante", temos o plasma, o qual caracteriza-se por ser um líquido venoso, um pouco mais amarelado.
Sem anticoagulante: Para obtenção do soro, é feita a coleta do soro, sem anticoangulante, e deixamos em banho maria, por mais ou menos 30 minutos, dependendo da temperatura, podemos deixá-lo em torno de 3 horas. O sangue começa a se manifestar e se concentrar, tornando um pouco mais escuro, aí teremos a formação do que chamamos de coágulo. Na porção intermediária, obtemos um tipo de aglomerado do coágulo, e a ele damos o nome de gel separador. Por último, obtemos a formação de um líquido acelular do sangue, chamada de sódio. O soro irá conter todas as substâncias orgânicas, íons e proteínas, com exceção das proteínas da coagulação sanguínea.
O sangue é o principal meio de transporte do organismo, sendo responsável por fornecer, retirar e conduzir substâncias úteis e tóxicas aos seus locais de utilização e depuração e eliminação, integrando todos os tecidos.
No sangue, nutrientes são ofertados aos tecidos, excretas são retirados e conduzidos aos órgãos que os neutralizam e eliminam, íons atuam nos mais diversos processos intra e extracelulares, hormônios sinalizam as modificações metabólicas em seus tecidos-alvo, gases respiratórios são conduzidos da superfície respiratória para os locais de consumo e vice-versa, proteínas com as mais variadas funções desempenham seus papéis, os elementos celulares realizam suas atividades, etc.
No sangue estão presentes duas classes de proteínas, a albumina e as globulinas.
A albumina é uma proteína de elevado valor biológico que é encontrada no plasma do sangue e é sintetizada pelo fígado, é a principal proteína circulante no organismo humano e é responsável pelo transporte plasmático de várias substâncias.
As globulinas abrangem enzimas, anticorpos e inúmeros outros tipos de proteínas, dentre as globulinas existem as alfa-globulinas, as beta-globulinas e as gama-globulinas. muitas alfa-globulinas atuando no transporte sanguíneo de substâncias, como o HDL, que transporta lipídeos, enquanto outras tem função enzimática, como a protrombina, que age na cascata de reações da coagulação sanguínea. O mesmo pode ser dito sobre as beta-globulinas. dois exemplos de beta-globulinas são o ldl, que realiza transporte de lipídeos, e o fibrinogênio, o qual também está envolvido no processo de coagulação sanguínea como precursor da fibrina. Finalmente, como exemplo de gama-globulinas, podem-se citar os anticorpos ig g e ig m, que são produzidos quando o organismo entra em contato com algum tipo de micro-organismo invasor.
Funções do sangue:
Transporte de:
O2 e CO2: as trocas gasosas ocorrem através do sangue;
Hormônios: através do sangue podem se comunicar com os diferentes tecidos, à diferentes distâncias;
Nutrientes: o sangue nutre os diferentes tecidos com tudo o que digerimos e absorvemos;
Restos metabólitos: o sangue por meio das excretas, pode transportar os restos metabólitos e também os metabólitos normais.
Homeostasia
Balanço hídrico: equilíbrio hidroeletrolítico;
Balanço ácido-base: existem tampões presentes no sangue;
Temperatura corporal: o calor circula através do sangue.
Defesa:
O sangue possui diferentes armas para a defesa do organismo. A defesa celular é dada pelo sistema autoimune, realizado pelo que chamamos de anticorpos.
Auto-defesa:
Também há mecanismos que o preservam, tais como: coagulação sanguíena; fubrinólise. Para que não haja perda subta de sangue no organismo, existem esses mecanismos que mantém o volume sanguíneo corporal.
Células do sangue:
Eritrócito: é a célula mais abundante do sangue, compreendendo mais ou menos 50% do seu volume, São os que chamamos de células vermelhas.
Leucócito: são as células brancas e compreendem menos de 1% do volume do sangue. Essas células são mais agressivas, sendo principalmente células de defesa. Dente elas, temos: neutrófilos; monócitos; linfócito (pequenos e grandes) e granulócitos (eosinófilos e basófilos).
Os metabólitos que encontramos no sangue são: glicose, lactato, piruvato, uréia, ácido úrico, creatina, aminoácidos, amônia, lipídeos, trialcilgliceroís e colesterol. Já os eletrócitos encontrados no sangue são: ânions (bicarbonato HCO3menos); Cloreto; proteínas, fosfato inorgânico. Também tem os cátions: Sódio; potássio; Ca2+ livre e Mg 2+ livre.
No fracionamento por salting in e salting out pretende-se realizar o fracionamento das proteínas através da salinização progressiva do meio. A salinização progressiva interfere nas interações proteína-proteína e proteína-água, alterando a solubilidade das proteínas em meio aquoso.
Quando pequena quantidade de sal é adicionada a solução, as cargas provenientes da dissociação do sal passam a interagir com a proteína, diminuindo a interação entre elas e, consequentemente, aumentando sua solubilidade em água. A esse fenômeno, dá-se o nome de salting in.
Conforme aumenta a quantidade de sal adicionado a solução, ocorre um efeito contrário, pois a água, embora interaja com a proteína e com os íons, apresenta maior tendência de solvatação de partículas menores, neste caso, os íons. as moléculas de água, envolvidas na interação com os íons, “abandonam” a estrutura protéica, aumentando a interação proteína-proteína e promovendo sua precipitação. a este fenômeno, dá-se o nome de salting out.
As primeiras proteínas que precipitam são as globulinas, consideradas um grupo de lipoproteínas que são principalmente transportadoras. As globulinas, possuem menos cargas disponíveis, então são mais instáveis, precipitando mais rapidamente.
No caso das albuminas, elas possuem mais cargas disponíveis, então, será mais estável e solúvel, permanecendo na solução, precipitando somente após um tempo maior. Elas tem maior influência no pH do sangue, podendo funcionar como um tampão (neutralizadoras). Através da salinização progressiva conseguimos separar as globulinas de albuminas.
Fracionamento por eletroforese
O fracionamento por eletroforese, neste método, há separação das proteínas por sua anfotericidade.
Compara-se a intensidade de coloração das bandas eletroforéticas.
Para que esta técnica seja realizada, temos que ter a seguinte condição: Ter um campo elétrico conhecido, embebido em uma solução tampão que mantenha o pH em torno de 9,0. As proteínas possuem ponto isoelétrico a um pH menos que 7,5. Nessa condição o número de cargas negativas é o mesmo que o de positivas. A intenção da eletroforese é que as proteínas corram pelo campo elétrico de um polo negativo para o polo positivo. Se a proteínas estiver em seu ponto isoelétrico, ela ficará parada no gel, e não correrá. Por isso usa-se essa solução tampão de pH 9,0. Desta forma, as proteínas ficam carregadas negativamente (carga líquida negativa) e correm para o polo positivo. Estas proteínas correm pelo campo de eletroforese em velocidades diferentes ( tem diferentes velocidades de difusão) e é assim que são diferenciadas e classificadas.
A eletroforese separa mais ou menos 5 diferentes proteínas:
Aquelas mais rápidas, dentre elas encontramos as albuminas (transportadoras de substâncias pouco solúveis), elas são um pouco mais rápidas do que as globulinas (alfa 1, alfa 2 e beta são as transportadoras) enquanto gama são as globuinas compostas por imuno-proteínas/anticorpos).
A identificação é feita por colorimetria ou por densitometria. Onde a coloração mostra o ponto no gel em que se encontram as proteínas, por faixa de cor. Enquanto a densitometria, colore o gel e quanto mais veloz, mais alto será o pico do gráfico gerado. Além de separar as proteínas, pode-se quantificar as diferentes frações de proteínas.
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